LES ENZYMES, DES BIOCATALYSEURS Fiche protocole - –candidat Préparation des tubes et du dispositif 1. veiller à utiliser, dans la préparation des tubes comme dans le protocole, une pipette par produit ; 2. préparer 3 tubes à essai, identifiés au feutre A, B et C, avec 5 mL de solution d’empois d’amidon 3. préparer 3 tubes à essai numérotés au feutre, avec : Document de référence : Résultats de l’hydrolyse spontanée de l’amidon (sans enzyme) Dans chaque tube : empois d’amidon à 37°C L’eau iodée met en évidence la présence d'amidon par une coloration bleu nuit. Matériel. L’amidon, est une très grosse molécule, dont l’absorption nécessite une hydrolyse préalable, c’est l’amylase une enzyme hydrolytique, qui hydrolyse progressivement les liaisons entre les molécules de glucose des chaînes formant l'amidon. L'hydrolyse de l'amidon par les amylases associée aux enzymes de débranchement et de finition donne des maltodextrines et des sirops de glucose avec des DE importants (on peut atteindre la valeur de 97% de glucose). Pour le tube 2 : La solution reste bleu. les tubes 1 & 2 montrent que la disparition de l’amidon est visible, sans avoir recours à l’eau iodée. Interprétation : L’amylase hydrolyse l’amidon à la température de 37°C. Résultats de l’hydrolyse spontanée de l’amidon 2 Tubes 1 à 4 : 10 mL d’empois d’amidon à 0,1%, 37°C Tubes 1 et 2 : test à l’eau iodée (pour tester la présence d’amidon) Tubes 3 et 4 : test à la liqueur de Fehling (pour tester la présence de glucose) Cette longue chaîne prend la forme d'une hélice (6 résidus de glucose par tour d'hélice), stabilisée par des liaisons hydrogène … Pour 200ml de tampon, mélanger 5ml de sol Na2HPO4 (=0.24g/10ml) et 195ml de sol KH2PO4 (=1.81g/200ml). Matériel pour les élèves : hydrolyse enzymatique de l’amidon-extrait de germes de blé frais : 10g de gerblé dans 100ml de tampon pH5.3 (voir D.POL p219 paragraphe 3.3. Elle représente 15 à 30% de la masse de l'amidon. L’enzyme utilisé pour cette hydrolyse de l’amidon est l’a amylase pancréatique (existe a amylase salivaire) qui produisent du maltose en passant par divers oligosaccharides. Pour le tube 3 : La solution reste bleu (témoin). C'est un polymère linéaire de résidus gluose liés par une liaison α-(1,4)-D-glucosi-dique. Photo n°2 : l’ajout de la liqueur de fehling fait "disparaître" les résultats du test à l’eau iodée. Les tubes 3 & 4 montrent la teinte à l’eau iodée après 10 d’action de l’amylase. L'amidon c'est en fait (sans entrer dans les détails) une longue chaine ramifiéé de glucose et donc au fur et à mesure de sa progression, les glucoses au bout des chaînes vont être hydrolysés et absorbés et ceci se fait progressivement jusqu'à l'hydrolyse complète de l'amidon. I.1 Principe de l’expérience : Dans cette expérience pour avoir visualiser la cinétique de dégradation de l’amidon par l’a amylase. On a détruit la structure de l’amidon en le chauffant. Correction du TP n°1: ETUDE DE LA SPECIFICITE DES ENZYMES DIGESTIVES Etape 1 : Concevoir une stratégie pour résoudre une situation problème (durée maximale : 10 minutes) Proposer une démarche d’investigation permettant de tester l’hypothèse qu’une glycosidase donnée catalyse de façon spécifique la réaction d’hydrolyse d’un glucide alimentaire. votre analyse des expériences pour démontrer que l’amylase répond à tous les critères ci-dessus. Hydrolyse de l’amidon à l’aide d’un catalyseur chimique. 125 mL d’empois d’amidon à 0,2 % portés à ébullition dans un erlenmeyer en présence de 5 mL d’acide chlorhydrique N/2 pendant respectivement 0, 5, 10, 15 et 20 min. Filtrer sur filtre papier . Cette première décomposition de l'amidon est stoppée par l'acidité de l'estomac mais reprend dans le duodénum (première partie de l'intestin grêle) grâce à … La digestion de l'amidon débute dans la bouche pendant la mastication grâce à une enzyme de la salive : l'amylase salivaire. On peut donc effectuer une catalyse compatible avec la vie humaine.